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維生素D3是脂溶性的，不溶于水，只能溶解在脂肪或脂肪溶劑中，在中性及堿性溶液中能耐高溫和氧化。據實驗，在130度條件下加熱90分鐘，其生理流行性仍不被破壞，但在酸性條件下則逐漸分解破壞，一般食物烹調加式樣過程中，不會損失，但脂肪酸敗時可以引起維生素D3的破壞。維生素D3的計量單位有兩種，即重量單位與國際單位。1微克D3相當于40國際單位；或1國際單位維生素D3相當于0.025微克膽鈣化醇。

維生素D3以海肝含量最為豐富，如每100克鱈魚、比目魚及劍魚肝中分別含維生素D3200~750微克、500~10000微克、25000微克。其他如鯡魚、鮭魚、沙丁魚及鯧鯨等含有少量；禽畜肝臟、蛋類和奶類也是含有少量，每100克含量在100微克以下。在一般情況下，單靠從食物中獲得足夠的維生素D3是不容易的，所以通過日光浴在體合成維生素D3是一個特別重要途徑。